“西塞山前白鹭飞，桃花流水鳜鱼肥”。自古以来，鳜一直是我国特有的淡水名贵鱼类。由于其肉质鲜美、营养丰富等特点深受消费者青睐。我国鳜鱼年产量30多万吨，产值超过200亿元。然而，随着人工养殖规模的扩大，病害的发生成为鳜鱼产业的重要危害，造成巨大的经济损失，已成为阻碍鳜鱼可持续发展的重要因素。鳜弹状病毒（Siniperca chuatsi Rhabdovirus，SCRV）是其重要的病害之一。
疫苗是病害防治和控制的关键要素，疫苗的开发和研制是其中最为核心的内容。魏永伟博士团队自2018年以来一直致力于SCRV疫苗研究，从疫苗株的分离到反向遗传系统的建立，近来取得了重要进展，突破了SCRV减毒疫苗研究的核心技术瓶颈。在国家要求“核心技术要自主可控”的大政方针下，研究团队取得的进步显得更加具有价值和意义，该研究拥有完全自主知识产权。
(1) 研究团队分离、纯化和鉴定了一株SCRV S3，克隆了其全基因组，并对其体内外生物学特性进行了系统研究。S3基因组全长11582bp，与分离自鲈鱼等类似病原体基因组同源性为92.17-97.63%；与水生动物中Perhabdovirus、Sprivivirus和Novirhabdovirus同源性分别为29.6-31.0%、25.7-25.8%和0.3%；与哺乳动物中Vesiculovirus和Lyssavirus同源性分别为25.0-25.9%和11.3%。在体外细胞实验中，S3生长温度上限为32℃，可测量的最低复制温度为10℃，最适生长温度为28℃。细胞嗜性研究表明温度是限制SCRV 传播的重要屏障，团队初步揭示了其传播屏障的分子机制。
图1 S3全基因组进化树关系图
(2) 系统研究了SCRV在不同条件下的热稳定性和环境稳定性。SCRV悬浮于培养基环境中时，在37℃下存活14天，25℃和15℃下则相对较稳定，分别可存活60天和150天，4℃的环境下表现出了更为明显的稳定性，滴度在一年内都维持在较高水平。SCRV在超纯水内稳定性与悬浮在培养基内较为接近，在池水中稳定性弱于在超纯水和培养基中的稳定性。在玻璃、不锈钢和塑料介质表面，在25℃条件下能存活6天，但在4℃条件下能存活长达1个月之久。常用的55℃30min热灭活方法不适用于SCRV，SCRV需要在60℃30min才能完全灭活。研究团队初步揭示了SCRV在不同条件下失活的分子机制，其失去活性的部分原因是由其基因组RNA被破坏导致。SCRV在体外的稳定性高于目前已用作疫苗载体的水泡性口炎病毒（VSV），说明SCRV作为疫苗载体将具有更好的稳定性，利于疫苗的保存和运输。
图2 SCRV S3在培养基中不同温度下的稳定性
(3)建立了稳定的、高效的SCRV反向遗传系统和SCRV微基因组分析系统，为开展SCRV减毒疫苗建立了强有力的技术平台。SCRV的拯救系统需要全长基因组序列（T7启动子启动转录），受T7启动子控制含N、P和L基因的辅助系统以及能表达T7 RNA聚合酶的细胞株。同时，为了区分于野生株，需在基因组内部引入分子标记。研究团队在S3基因组cDNA第10574位点将碱基C突变成T，突变后产生一个Spe I酶切位点作为分子标记，成功拯救出含分子标记的rS3。拯救的rS3与原S3株生物学特性一致。同时，研究团队建立了SCRV微基因组S3miniEGFP，微基因组是一种含SCRV S3株基因组5＇和3＇非编码区，中间含EGFP基因但不含任何SCRV蛋白基因的cDNA，在靶细胞内能转录出含EGFP的单链反义RNA，可模拟SCRV的转录和蛋白表达。建立的SCRV反向遗传系统和SCRV微基因组分析系统将为SCRV疫苗研究提供强有力的技术保障。
图3 SCRV S3反向遗传系统及微基因组结构模式图
图4 SCRV S3及拯救的rS3体内外生长特征
孙子兵法曰“知彼知己，方可百战不殆”。病原学研究不是目的，只是手段，通过病原学研究了解病原，熟悉病原，最终控制和消灭病原。团队目前的研究属基础研究，但研究的最终目的是开发药物和疫苗。今后，团队将利用基础性研究成果，开展SCRV新型疫苗及疫苗株作为疫苗载体为其它疾病的预防和控制提供强有力的理论和技术支持，造福人类健康。
团队近期发表的相关文章：
（1）Liu, X.Y., Zhang, X.D., Xu, Z.D., Huang, Z.Y., Zhong, J.Y., Zhu, Y.Z., Wei, Y.W(通讯作者). Isolation, genomic and biological characterizations of a rhabdovirus from mandarin fish (Siniperca chuatsi). Aquaculture, 2023, 563, 738894.
（2）Liu, X.Y., Zhang, X.D., Xu, Z.D., Huang, Z.Y., Zhong, J.Y., Zhu, Y.Z., Wei, Y.W (通讯作者). Recovery of Siniperca chuatsi rhabdovirus from cloned cDNA. Journal of fish diseases，2023，46, 127-135.
（3）Xu, Z.D., Huang Z.Y., Zhong, J.Y., Zhu, Y.Z., Liu, X.Y., Wei, Y.W (通讯作者). Thermal and environmental stability of Siniperca chuatsi Rhabdovirus. Aquaculture, 2023, 568, 739308.
（医学科研中心）
